YY/T 0870.3-2013 医疗器械遗传毒性试验 第3部分:用小鼠淋巴瘤细胞进行的体外哺乳动物细胞基因突变试验优质

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YY/T 0870.3-2013.Test for genotoxicity of medical devices-Part 3: In vitro mammalian cell gene mutation test using mouse lymphoma cells.

6.1细胞株

推荐使用小鼠淋巴瘤细胞株(L5178Y Tk+/-3.7.2C). 经过传代培养后,细胞呈对数生长状态，但细胞持续培养*多不超过3个月。鉴于细胞性状稳定性要求,试验细胞株*好新取自冻存细胞。细胞在35 C~38 C振荡培养,增殖周期为10 h左右。

6.2细胞自发突变清除

6.2.1应适时检查冻存细胞的自发突变频率。 -般地，试验细胞株的平均自发突变频率在35X10- °~140X10。范围内。当细胞突变频率偏高时,按6.2.2~6.2.4对自发突变细胞进行清除。

6.2.2将对数生 长的细胞配制成2X 105个/mL,加入100倍的THMG液,加人量为总体积的1%。置COz培养箱(含体积分数5% CO3,下同)培养24 h。

6.2.3培养24h后以200g离心5min,除去上清液,加入新鲜RPMI1640培养液,细胞浓度调整为2X105个/mL。加入100倍的THG液,加入量为总体积的1%。培养45 h~48 h,注意避免过度培养。

6.2.4将培养后的细胞以200g离心5min,除去上清液后加入冻存液,细胞浓度调整为2X10*个/mL~5X109个/mL.分装于冻存管中冻存。

6.3支原体污染检测

宜在制备冻存细胞液之前以及准备丢弃过期的细胞之前进行支原体的检测,以保证在细胞培养周期中无支原体的污染。支原体污染的检测可以采用直接培养法或间接Hoechst染色法。

6.4核型稳定性检测

宜通过检测平均染色体数目来判断核型稳定性,通常在细胞生长周期过程中和准备丟弃过期的细胞之前进行,以保证在细胞培养周期中没有发生核型的变化。核型分析,包括染色体分带在制备冻存细胞液前进行。

7试验前准 备

7.1器具灭菌

与试验和对照样品接触的所有器具应采用可靠方法灭菌,置压力蒸汽灭菌器内121 c 30 min,或置电热干燥箱内160 C 2 h。

7.2试验环境要求

试验应在无菌操作台或超净工作台中进行。

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